自从美国科学家威拉德.博伊尔和乔治.史密斯于1969年发明了半导体集成电路成像技术,CCD 感应器。 CCD 数码成像对摄影产生了革命性的影响。在感光胶片之外，人们可以通过电子电路捕捉图像，这些以数字形式存在的图像更加易于处理和分发。数字图像已经成为许多研究领域中不可替代的重要工具。

数码成像技术应用到显微镜上，以替代以往的胶卷拍摄，现在已经广泛应用了。以前我们用胶卷来进行显微拍摄，要等一卷拍完，冲洗出来才能确定拍摄的图像是否清晰，如果拍摄的图像不理想，而显微观察的样品又失效了，就需要重新制作样品，给研究工作带来很大的不便，而现在使用显微镜摄像头来拍摄显微图像，所见即所得，当时就是保存处理，甚至统计分析，极大的提高了工作效率。

二、显微镜摄像头的组成

显微镜摄像头包括 CCD / CMOS 专业相机，图像采集处理软件，显微镜接口，数据传输线等，其中最核心的设备是 CCD 和 CMOS 图像传感器，前者由光电耦合器件构成，后者由金属氧化物器件构成。两者都是光电二极管结构感受入射光并转换为电信号，主要区别在于读出信号所用的方法。

CCD (Charge Coupled Device ，感光耦合组件)上感光组件的表面具有储存电荷的能力，并以矩阵的方式排列。当其表面感受到光线时，会将电荷反应在组件上，整个 CCD 上的所有感光组件所产生的信号，就构成了一个完整的画面。 CCD 的结构分三层 ，第一层“微型镜头”“ON-CHIP MICRO LENS”，这是为了有效提升 CCD 的总像素，又要确保单一像素持续缩小以维持 CCD 的标准面积，在每一感光二极管上(单一像素)装置微小镜片。 CCD 的第二层是“分色滤色片”，目前有两种分色方式，一是RGB原色分色法，另一个则是CMYG补色分色法。原色 CCD 的优势在于画质锐利，色彩真实，但缺点则是噪声问题。第三层：感光层，这层主要是负责将穿过滤色层的光源转换成电子信号，并将信号传送到影像处理芯片，将影像还原。

数码成像的核心器件除 CCD ,现在越来越多的使用 CMOS (Complementary Metal-Oxide Semiconductor，互补性氧化金属半导体， CMOS 和 CCD 一样同在数码相机中可记录光线变化的半导体。 CMOS 传感器中每一个感光元件都直接整合了放大器和模数转换逻辑，当感光二极管接受光照、产生模拟的电信号之后，电信号首先被该感光元件中的放大器放大，然后直接转换成对应的数字信号。 CMOS 的优势在于成本低，耗电需求少，便于制造， 可以与影像处理电路同处于一个芯片上，缺点是较容易出现杂点。

三 显微镜摄像头相关参数

对 CCD / CMOS 数码成像系统的结构和原理有了一个基本了解后，我们再对成像系统的一些基本参数作一个说明。在实际应用中，很多用户对像素多少很敏感，一上来就提到我要多少万像素的成像系统，其实在专业成像应用中，像素多少只是影响成像的一个因素，还有其他很多指标，包括分辨率，感光器件大小，动态范围,灵敏度，量子效率，信噪比等。

感光器件的面积大小是衡量显微镜摄像头质量的一个重要指标，感光器件的面积越大，捕获的光子越多，感光性能越好，信噪比越低。当前数码成像系统中较常应用的感光器件规格如下：1英寸（靶面尺寸为宽12.7mm*高9.6mm，对角线16mm），2/3英寸， 1/2英寸，1/3英寸，另外有时也用到1/1.8英寸,1/2.5英寸的 CCD / CMOS 感光器件。

像素是 CCD / CMOS 能分辨的最小的感光元件，显微镜摄像头的像素由低到高有：45万左右，140万左右，200万左右，300万左右，500万左右，900万像素，甚至还有更高的达到2000万像素以上。一般来说，像素越高，图像分辨率越高，成像也就越清晰，但有时候图像分辨率达到一定程度后，就不是影响成像质量的主要指标了。比如图像分辨率高，噪声也很高时，成像质量也不会很好。暗电流是导致 CCD 噪音的很重要的因素。暗电流指在没有曝光的情况下，在一定的时间内， CCD 传感器中像素产生的电荷。我们在做荧光拍摄的时候，需要的曝光的时候比较长，这样导致 CCD 产生较多的暗电流，对图像的质量影响非常大。通常情况下通过降低 CCD 的温度来最大限度的减少暗电流对成像的影响。Peltier制冷技术一般可将 CCD 温度降低5-30°C，在长时间拍摄或一次曝光超过5-10秒， CCD 芯片会发热，没有致冷设备的芯片，“热”或者白的像素点就会遮盖图像，图像会出向明显的雪花点。 CCD 结构设计、数字化的方法等都会影响噪音的产生。当然通过改善结构、优化方法，同样能减少噪音的产生。显微荧光或其他弱光的拍摄对 CCD 噪音的降低要求很高，应选用高分辨率数字冷却 CCD 成像系统，使其能够捕获到信号极其微弱的荧光样品图像，并且能够最大程度的降低噪音，减少背景，提供出色的图像清晰度。所以一般在荧光及弱光观察时需要选择制冷 CCD 。

在显微数码成像过程中，对于荧光及弱光的拍摄，除了制冷降低热噪声外，还可使用 BINNING技术提高图像的灵敏度，BINNING像素合并是一种非常有用的功能，它可被用来提高像素的大小和灵敏度，比如摄像头像素大小为5u,当经过2x2合并后，像素大小为10u，3X3合并后，像素大小为15u, 这是图像的整体像素变少了，但成像的灵敏度可提高9倍。

动态范围表示在一个图像中最亮与最暗的比值。12bit表示从最暗到最亮等分为212＝4096个级别，16bit即分为216个级别，可见bit值越高能分出的细微差别越大，一般 CMOS 成像系统动态范围具有8-10bit, CCD 以10-12bit为主，少部分可达16bit。对动态范围进行量化需要一个运算公式，即动态范围值 = 20 log (well depth/read noise)，动态范围的值越高成像系统的性能就越好。

量子效率也称像素灵敏度，指在一定的曝光量下,像素势阱中所积累的电荷数与入射到像素表面上的光子数之比。不同结构的 CCD 其量子效率差异很大。比如100光子中积累到像素势阱中的电荷数是50个，则量子效率为50％（100 photons = 50 electrons means 50% efficiency）。值得注意的是 CCD 的量子效率与入射光的波长有关。

对显微镜摄像头的参数有了整体认识后，在实际应用中选择合适型号的产品就比较容易了。高分辨率显微数码成像技术在国外已有二十来年的发展历史，产品目前已比较成熟。国外的专业数码产品有多个品牌，比较著名的有德国的ProgRes，美国Roper Scientific的系列产品，另外OLYMPUS、NIKON、LEICA、ZEISS等显微镜厂家也有一些配套的专业数码成像系统 。其中 CCD 成像系统主要采用SONY及KODRA公司的芯片，因此相关产品性能差别不是很大。

国内专业数码成像产品的设计制造时间还不长，但随着配套技术的成熟，100万像素以上的 CCD / CMOS 专业数码成像产品开始陆续推出，主要的专业厂家有北京的大恒、微视、杭州欧普林，广州明美等企业。北京大恒早期主要研发生产图像采集卡，目前可以量产140万像素的 CCD 摄像头，130万/200万/320万/500万像素 CMOS 摄像头，主要用到工业领域。广州明美是国内少数专业从事显微数码成像产品研发与销售的高新技术企业，由于具有雄厚的显微镜技术背景，明美推出的130万-900万系列 CMOS 专业成像系统，1/2\ 2/3 寸140万像素、300万像素的 CCD 显微镜摄像头，都专门针对显微成像的特点,对底层驱动软件进行了修正，使之显微成像操作更方便，色彩还原更真实，清晰度更高。

显微镜摄像头一般都是在电脑上预览与保存，因此需要配套的相应的图像采集及处理软件，这方面国内由于知识产权保护等原因，很多公司对软件的开发重视程度不够，认为硬件开发出来就万事大吉了，结果很多国产的成像系统的控制调节不方便，功能有限，需要专业的操作人员才能得到好的图象，影响了市场的普及推广，不过最近两年这种情况有了明显的改进，明美光电，欧普林科技等公司都推出了配套的功能丰富的软件系统。

2009年中，明美在国内首家推出了采用SONY芯片的500万像素冷 CCD 显微镜摄像头MC50，其相关技术指标达到了国际知名的Roper Scientific公司MP5.0的标准，实际拍摄效果与进口产品相比也毫不逊色，操作人性化方面则更胜一筹，最重要的是，MC50的价格只有国外同类产品的一半左右，这样会大大推动高端显微镜摄像头的应用与普及，真正打破了国外厂家在专业高端数码成像领域的垄断。

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