先来了解一下尼康落射荧光显微镜Optiphot-2 结构图片：

步骤一：荧光观察及开机

• 开启荧光电源，此时绿灯会亮起，一定要持续压着激发钮约5 - 10秒待橘灯亮起后或是闪烁后橘灯熄，才可放手。若是灯无法亮起，请关电源重新打开绿灯，一定要持续压着激发钮约5 秒以上待橘灯亮起后，才可放手。等待约10秒橘灯再亮起，灯源才会稳定，但此时荧光汞灯尚未完全气化, 要等待约10分钟后可开始使用。

• 将明视野卤素灯源关到最小，依据所使用之荧光染剂将相符之荧光滤片转至定位，确定shutter切到O之位置即可观察。

• 荧光灯源开机后至少使用30分钟，关机后距离下次开机时间最少须间隔30分钟。

• 使用荧光UV 滤片要注意亮度,若示灯源太强,请使用ND滤片

步骤二：显微镜主机操作

• 打开灯源，置上标本，调整亮度。

• 先以4X观察（此时聚光镜要旋出），转粗调对焦，10X以上之物镜不可将聚光镜旋出。

• 调整瞳孔距离。

• 视差调整：闭左眼调右边，闭右眼调左边。

• 聚光镜光圈切至物镜NA值70﹪~80﹪位置。

• 聚光镜调整至最高位置。

• 光轴校正之步骤：（搬动显微镜才需做）：

1.先以10倍对焦标本。

2.将视野光圈关至最小。

3.升降聚光镜至八角形最清楚。

4.视野光圈放大至接近视野。

5.若八角形不在中心，则旋转聚光镜位置调钮至最中心。

6.再将光圈稍放大比视野大即可。

• 物镜切换由低倍渐至高倍，4x、10x可以用粗调节轮调整，40x、100x只能以细调节轮做微调调整，如此才能避免物镜与玻片磨损造成刮伤。

• 40x 物镜上有一圈校正环，可旋转，调整影像清晰度。

• 100倍物镜为油镜，使用时需滴镜油，用完后须以拭镜纸沾95﹪以上酒精多次擦拭才能干净。

• 若玻片有滴油，请勿以40倍物镜观察，以免镜油沾到影响观察；若沾到油，则以拭镜纸沾95﹪以上酒精多次擦拭干净即可。

步骤三：图像提取

• 将需提取的图像置于视野正中央，将目镜筒以顺时针方向转90度，将影像切换至相机。

• 在电脑打开ACT-1软件，提取图像。

• 此外可以参阅ACT-1 软件使用手册。